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什么是原位杂交?原位杂交技术的原理是什么?

发布时间:2020-04-03 点击量:105
   什么是原位杂交?原位杂交技术的原理是什么?
  原位杂交是指将已知的特定标记核酸序列与细胞或组织中的核酸进行杂交,并从序列中精确定量定位特定核酸的过程。该杂交实验可以在细胞或组织标本上进行。
  它属于一种分子杂交技术。它是利用标记探针与待测核酸在组织和细胞中杂交,然后利用标记相关检测系统显示核酸的原始位置的一种检测技术。
  杂交的实质是在一定的温度和离子浓度下,通过碱基互补法则,将单链探针与特定序列的核酸结合起来,在组织细胞中检测到核酸,使组织细胞中的特异核酸通过探针上标记的检测系统定位并显示在核酸的原始位置。
  其基本原理是两条核苷酸单链?段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA 或RNA-RNA 双键分?的特点,应?带有标记的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、荧光素?物素、地??等?放射性物质)DNA 或RNA ?段作为核酸探针,与组织切?或细胞内待测核酸(RNA 或DNA)?段进?杂交,然后可?放射?显影等?法予以显示,在光镜或电镜下观察?的mRNA 或DNA的存在并定位。
  原位杂交的应用:
  1、细胞特异性mRNA 转录的定位,可?于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究。
  2、感染组织中病毒DNA/RNA 的检测和定位,如EB 病毒mRNA、?类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA 的检测。
  3、癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录?平的表达及其变化的检测。
  4、基因在染?体上的定位。
  5、检测染?体的变化,如染?体数量异常和染?体易位等。
  6、分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些肿瘤的诊断和?物学剂量测定等。
  目前,原位杂交已成为当今细胞?物学、分??物学研究的重要?段之一。此?法有很?的敏感性和特异性,可进?步从分??平来探讨细胞的功能表达及其调节机制,因此其在生物学界起到的作用是非常大的。

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