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RNA原位杂交技术的优点及在实验时的注意事项

发布时间:2020-04-23 点击量:100
   RNA原位杂交技术的优点及在实验时的注意事项
  RNA原位杂交技术可以提供RNA在组织和细胞中的空间表达信息。其中原位杂交可分为群体原位杂交和组织原位杂交。群体原位杂交是将细菌从培养板转移到硝化纤维素膜上,然后将膜上的菌落分裂释放DNA。将DNA干燥固定在膜上,然后释放膜上的菌落裂殖子释放DNA,用32P标记的探针进行杂交。用放射自显影法检测菌落杂交信号。
  而组织原位杂交是指组织或细胞的原位杂交,它不同于群体原位杂交。菌落原位杂交需要分裂细菌释放的DNA,然后进行杂交。原位杂交,经过适当的处理,增加细胞的通透性,并允许探针进入细胞与DNA或RNA杂交。
  RNA原位杂交技术在实验中的注意事项有哪些?
  1、整个实验过程中,切勿切片干燥,否则会严重影响实验结果。
  2、玻片包括盖片和载玻片用热肥皂水刷洗,自来水清洗干净后,置于清洁液中浸泡24h,清水洗净烘干,95%乙醇中浸泡24h后蒸馏水冲洗、烘干,烘箱温度应在150℃或以上过夜除去所有RNA酶。盖玻片在有条件时应用硅化处理,锡箔纸包裹无尘存放。
  3、由于在手指皮肤及实验玻璃皿上均可能有RNA酶,为防止其污染影响实验结果,在整个杂交前一日置高温(240℃)烘烤以达到消除RNA酶的目的。要破坏RNA酶,其低温度必须在150℃左右。
  4、原位杂交固定的目的是为了保持细胞结构,大限度地保存细胞内DNA或RNA的水平,使探针易于进入细胞或组织。DNA较稳定,RNA易被酶解,在RNA定位上,若要使RNA的降解减少到低限度,取材后应尽快予以冷冻或固定。
  RNA原位杂交技术的优点:
  1、能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其它成分的影响,因此对于那些细胞数量少切散在与其他组织中的细胞内DNA或RNA研究更为方便。
  2、由于原位杂交不需要从组织中提取核酸,对于组织中含量较低的靶序列有极高的敏感性,并可完整地保持组织与细胞的形态,更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。

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